МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА
РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Набор для диагностики парагриппа-3
крупного рогатого скота в реакции торможения гемагглютинации (РТГА)
ТУ-10-19-84-89
1.Антиген гемагглютинирующий
-1 флакон-2 мл
2.Сыворотка специфическая -1
флакон-1 мл
3.Сыворотка отрицательная -1
флакон-1 мл
1. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
Гемагглютинирующий антиген представляет собой аморфную
массу светло-розового цвета, антигены расфасованы во флаконы по 2 мл. Сыворотки
представляют собой аморфную массу, желтовато-белого цвета. Расфасованы в пробирки эппендорфа по 1 мл.
На этикетках флаконов с гемагглютинирующим антигеном
указаны: название препарата, количество препарата во флаконе, номер серии,
номер контроля, дата изготовления. На этикетках эппендорфа с сывороткой
указаны: название сыворотки, количество сыворотки в эппендорфе, номер серии,
номер контроля, дата изготовления.
Все упаковано в коробки с разделительными
перегородками, обеспечивающими целостность флаконов. В каждую коробку
вкладывают наставления по применению набора.
Набор рассчитан на 100 исследований. Срок годности
набора 12 месяцев со дня изготовления при надлежащем хранении. Набор хранят в
сухом, темном месте при температуре от 3 до 7⁰С (можно замораживать).
Антиген ПГ-3 предназначен для титрования антител в
сыворотках крови крупного рогатого скота в реакции задержки гемагглютинации
(РЗГА).
2.ПОДГОТОВКА К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ.
РЗГА ставят с использованием микропланшета с U-образными лунками для микротитрования.
2.1.Проверка титра антигена.
Во все лунки микропанели вносят по 0,05 мл
физиологического раствора pH 7,2-7,4. В
первые лунки каждого ряда вносят по 0,05 мл антигена и титруют для двукратного
разведения от 1:2 до его придельного титра, указанного на этикетке. Затем во
все лунки вносят по 0,05 мл 1% суспензии эритрацитов морской свинки (кровь
берут у морской свинки из сердца, в колбу с 1% взвесью лимонно-кислого-Na на физиологическом растворе pH 7,2-7,4; далее отмывают на физиологическом растворе pH7,2-7,4 и готовят 1% взвесь).
2.2.Проверка 4АЕ антигена
Титр антигена делят на 4 (т.е. если титр 512:4=128,
значит антиген необходимо развести в 128 раз). Для этого берут 1 мл антигена и
127 мл физиологического раствора pH 7,2-7,4.
Хорошо взбалтывают.
Для проверки 4АЕ во все лунки вносят физиологический
раствор рН 7,2-7,4 по 0,05 мл. Далее в первые лунки каждого ряда вносят заранее
разведенный антиген, титруют и во все лунки вносят 1% взвесь эритроцитов
морской свинки, встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 2 часа.
3. ПОСТАНОВКА В РЕАКЦИИ ЗАДЕРЖКИ
ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РЗГА).
3.1.Подготовка сывороток.
3.1.1.Сыворотки разводят 1:4 дистиллированной водой и
прогревают 30 минут при температуре 56⁰С.
Во все лунки микропланшета вносят по 0,05 мл
физиологического раствора рН 7,2-7,4, далее для получения достоверных
результатов, каждую сыворотку вносят в первые лунки двух рядов, протитровать,
внести во все лунки антиген (4АЕ), встряхнуть и оставить на 60 минут при температуре
37⁰С.
3.1.2. Через 60 минут - во все лунки внести по 0,05 мл
1% взвеси эритроцитов морской свинки, встряхнуть и оставить при комнатной температуре
на 2-3 часа.
4.УЧЕТ
РЕАКЦИИ.
4.1.Реакцию учитывают через 3 часа.
За титр антител в РЗГА принимают наивысшее разведение
сыворотки, дающее четкое торможение агглютинации (пуговица).
4.2.Учет реакции проводят только при условии четких
результатов, полученных в контролях.
4.3.Контроли реакции:
1.Физиологический раствор + эритроциты морской свинки –
«О»
2.Физиолгический раствор + отрицательная сыворотка +
эритроциты морской свинки – «1:8»
3.Физиологический раствор + специфическая сыворотка +
эритроциты морской свинки – «1-128»
Положительной является сыворотка, дающая в РЗГА титры
1:16 и выше.
Увеличение титров в парных сыворотках в четыре раза и
выше, а так же увеличение числа серопозитивных сывороток, свидетельствует о наличии
инфекции.
Разведенный антиген храниться при температуре +4⁰С -24 часа, а неразведенный в морозильной камере (18⁰С) до 1 года.