Набор эритроцитарного диагностикума для серодиагностики парагриппа-3 КРС в реакции непрямой гемагглютинции (РНГА)

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Набор для диагностики парагриппа-3 крупного рогатого скота в реакции торможения гемагглютинации (РТГА)

ТУ-10-19-84-89

1.Антиген гемагглютинирующий -1 флакон-2 мл

2.Сыворотка специфическая -1 флакон-1 мл

3.Сыворотка отрицательная -1 флакон-1 мл

1. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

Гемагглютинирующий антиген представляет собой аморфную массу светло-розового цвета, антигены расфасованы во флаконы по 2 мл. Сыворотки представляют собой аморфную массу, желтовато-белого цвета. Расфасованы в  пробирки эппендорфа по 1 мл.

На этикетках флаконов с гемагглютинирующим антигеном указаны: название препарата, количество препарата во флаконе, номер серии, номер контроля, дата изготовления. На этикетках эппендорфа с сывороткой указаны: название сыворотки, количество сыворотки в эппендорфе, номер серии, номер контроля, дата изготовления.

Все упаковано в коробки с разделительными перегородками, обеспечивающими целостность флаконов. В каждую коробку вкладывают наставления по применению набора.

Набор рассчитан на 100 исследований. Срок годности набора 12 месяцев со дня изготовления при надлежащем хранении. Набор хранят в сухом, темном месте при температуре от 3 до 7⁰С (можно замораживать).

Антиген ПГ-3 предназначен для титрования антител в сыворотках крови крупного рогатого скота в реакции задержки гемагглютинации (РЗГА).

2.ПОДГОТОВКА К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ.

РЗГА ставят с использованием микропланшета с U-образными лунками для микротитрования.

2.1.Проверка титра антигена.

Во все лунки микропанели вносят по 0,05 мл физиологического раствора pH 7,2-7,4. В первые лунки каждого ряда вносят по 0,05 мл антигена и титруют для двукратного разведения от 1:2 до его придельного титра, указанного на этикетке. Затем во все лунки вносят по 0,05 мл 1% суспензии эритрацитов морской свинки (кровь берут у морской свинки из сердца, в колбу с 1% взвесью лимонно-кислого-Na на физиологическом растворе pH 7,2-7,4; далее отмывают на физиологическом растворе pH7,2-7,4 и готовят 1% взвесь).

2.2.Проверка 4АЕ антигена

Титр антигена делят на 4 (т.е. если титр 512:4=128, значит антиген необходимо развести в 128 раз). Для этого берут 1 мл антигена и 127 мл физиологического раствора pH 7,2-7,4. Хорошо взбалтывают.

Для проверки 4АЕ во все лунки вносят физиологический раствор рН 7,2-7,4 по 0,05 мл. Далее в первые лунки каждого ряда вносят заранее разведенный антиген, титруют и во все лунки вносят 1% взвесь эритроцитов морской свинки, встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 2 часа.

3. ПОСТАНОВКА В РЕАКЦИИ ЗАДЕРЖКИ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РЗГА).

3.1.Подготовка сывороток.

3.1.1.Сыворотки разводят 1:4 дистиллированной водой и прогревают 30 минут при температуре 56⁰С.

Во все лунки микропланшета вносят по 0,05 мл физиологического раствора рН 7,2-7,4, далее для получения достоверных результатов, каждую сыворотку вносят в первые лунки двух рядов, протитровать, внести во все лунки антиген (4АЕ), встряхнуть и оставить на 60 минут при температуре 37⁰С.

3.1.2. Через 60 минут - во все лунки внести по 0,05 мл 1% взвеси эритроцитов морской свинки, встряхнуть и оставить при комнатной температуре на 2-3 часа.

4.УЧЕТ РЕАКЦИИ.

4.1.Реакцию учитывают через 3 часа.

За титр антител в РЗГА принимают наивысшее разведение сыворотки, дающее четкое торможение агглютинации (пуговица).

4.2.Учет реакции проводят только при условии четких результатов, полученных в контролях.

4.3.Контроли реакции:

1.Физиологический раствор + эритроциты морской свинки – «О»

2.Физиолгический раствор + отрицательная сыворотка + эритроциты морской свинки – «1:8»

3.Физиологический раствор + специфическая сыворотка + эритроциты морской свинки – «1-128»

Положительной является сыворотка, дающая в РЗГА титры 1:16 и выше.

Увеличение титров в парных сыворотках в четыре раза и выше, а так же увеличение числа серопозитивных сывороток, свидетельствует о наличии инфекции.